물 순도는 고성능 액체 크로마토그래피 결과에 어떤 영향을 미칩니까?

지난주에 완벽하게 작동했던 그래디언트 방법을 실행했습니다. 교정 표준물질은 깨끗해 보이지만 샘플 크로마토그램에서는 23.8분에 추가 피크가 나타납니다. 컬럼을 교체하고, 새로운 버퍼를 준비하고, 검출기를 확인합니다. 정점은 아직 남아있습니다. 그런 다음 이동상으로 들어가는 물을 교환하면 유물이 사라집니다. 이것이 고성능 액체 크로마토그래피의 현실입니다. 모든 분리에는 물의 순도가 중요하며, 순도가 변하면 분석법도 그에 따라 변합니다.

물 순도는 기본 안정성, 피크 모양, 머무름 재현성, 기기 수명이라는 네 가지 실질적인 방식으로 HPLC 데이터 품질에 영향을 미칩니다. 관련된 오염 물질은 유기 분자, 용해된 이온, 입자 또는 미생물일 수 있습니다. 한 종류의 불순물이 소량이라도 그 농도에 비례하지 않는 결과를 초래할 수 있습니다.

HPLC에 대한 물 순도의 주요 효과

HPLC 시스템에서 물은 수동적 배경이 아닌 시약입니다. 이는 완충액을 운반하고 시료를 용해하며 검출기 배경에 기여합니다. 따라서 물의 불순물은 분석 신호로 직접 이동합니다. 아래 표에는 가장 일반적인 오염물질과 그 영향이 요약되어 있습니다.

이러한 효과는 단지 이론적인 것이 아닙니다. 저수지에 있는 미생물 생물막은 UV 흡수 대사산물을 방출할 수 있으며, 일단 그 막이 형성되면 저수지를 청소하고 소독할 때까지 단순히 물을 교체하는 것만으로는 문제를 해결할 수 없습니다.

"HPLC 등급"과 1종 물의 실제 의미

대부분의 분석 방법에는 유형 1 사양을 충족하는 물이 필요합니다. 실용적인 측면에서 이는 섭씨 25도에서의 저항률이 약 18.2메그옴-센티미터이고 전도도가 센티미터당 0.055마이크로시멘스에 가까우며 총 유기 탄소가 물이 눈에 보이는 UV 또는 MS 배경을 생성하지 않을 만큼 낮다는 것을 의미합니다. 저항력만으로는 충분하지 않습니다. 또한 TOC 수준, 입자 수 및 일부 응용 분야에서는 규산염 또는 나트륨 값을 알아야 합니다.

정제수의 pH는 유용한 사양이 아닙니다. 초순수는 완충 능력이 거의 없고 공기 중의 이산화탄소를 빠르게 흡수하므로 측정된 pH 5.6 부근은 단순히 용해된 CO2를 반영합니다. 중요한 pH는 준비한 완충 이동상의 pH입니다.

수질 요구 사항도 감지기에 따라 달라집니다. 210 nm에서의 UV 검출은 많은 탄소-산소 및 탄소-질소 결합이 그곳에서 흡수되기 때문에 유기 오염에 특히 민감합니다. LC-MS에는 이온 억제 및 부가물 형성을 방지하기 위해 비휘발성 불순물이 매우 낮은 물이 필요합니다. 증발 감지기는 배경 신호를 높이기 때문에 비휘발성 오염의 영향을 유사하게 받습니다. 따라서 유형 1 물은 거의 모든 HPLC 응용 분야의 건전한 출발점입니다.

병에 든 HPLC 등급 물도 효과가 있지만 올바르게 보관하고 취급해야 합니다. 분석 증명서를 확인하고 로트 번호를 기록하고 오래된 용기에 생물학적 성장이 없다고 가정하지 마십시오.

기울기 용출을 통해 물의 불순물을 눈으로 확인할 수 있습니다.

수분 불순물은 그래디언트 방법에서 가장 잘 보입니다. 등용매 실행에서는 UV 흡수 오염 물질이 기준선을 약간 높일 수 있습니다. 기울기에서는 물 비율이 높게 시작되고 유기 용매 비율은 시간이 지남에 따라 증가합니다. 오염물질은 컬럼 헤드에 남아 있다가 유기 함량이 증가함에 따라 용출될 수 있습니다. 이로 인해 통합 및 정량화를 방해할 수 있는 고스트 피크와 기준선 표류가 생성됩니다.

그렇기 때문에 블랭크 그라데이션은 수질을 확인하는 가장 간단한 검사 중 하나입니다. 샘플을 주입하지 않고도 정확한 그래디언트를 실행해 보세요. 공백에 피크가 나타나면 이동상이 의심되는 것입니다.

물의 순수함을 지키는 일상 습관

순수한 물은 우연히 순수하게 유지되지 않습니다. 다음 습관은 HPLC 실습에서 가장 흔히 발생하는 문제를 예방합니다.

• 깨끗한 카트리지, 제대로 작동하는 UV 램프, 정기적인 소독을 갖춘 정수 시스템의 물을 사용하세요.
• 깨끗하고 뚜껑이 있는 용기에 물을 모으십시오. 시스템이 실행되는 동안 컨테이너를 열어 두지 마십시오.
• 며칠 동안 물을 저장하지 마십시오. 가능하면 당일에 담수로 이동상을 준비하십시오.
• 부분적으로 채워진 저수지에 담수를 추가하지 마십시오. 저장소 내용물을 채우는 대신 교체하십시오.
• 분석에 사용된 파장에서 빈 그래디언트를 실행하고 결과를 기록합니다.
• 분석 기록에 저항률, TOC 및 물 수집 날짜를 기록하십시오.

생수를 사용하는 실험실에도 동일한 규칙이 적용됩니다. 유통기한을 확인하고, 사용 후에는 즉시 용기를 닫고, 비커에 담긴 사용하지 않은 물은 병에 다시 넣지 마세요.

첨가제는 물 문제를 방법 문제로 전환시킵니다.

이동상에는 물만 포함되는 경우가 거의 없습니다. 완충염, 산, 이온쌍 시약 및 일부 특수 변형제는 상대적으로 낮은 농도로 첨가됩니다. 물에 미량의 UV 흡수 불순물이 포함되어 있는 경우 이러한 불순물은 완충 용량을 변경하지 않을 수 있지만 여전히 검출기 신호에 나타날 수 있습니다.

이온성 액체는 때때로 피크 모양이나 선택성을 개선하기 위해 이동상 변형제로 사용됩니다. 하나를 선택할 때에도 동일한 순도 기준이 적용되어야 합니다. 예를 들어, 1-에틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트 크로마토그래피 연구에 흔히 사용되는 이온성 액체입니다. 이는 이미 유형 1 사양을 충족하는 물에 용해되어야 합니다. 그렇지 않으면 첨가제가 또 다른 오염원이 됩니다. 이들 화합물의 분리 관련 특성을 이해하고 싶다면 당사의 분리 공정에서 이온성 액체의 성능 개요 실용적인 변수를 다루고 있습니다.

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순수성은 공급업체로부터 시작됩니다

Zhejiang Ldet에서는 이온성 액체와 특수 화학물질을 제조합니다. 우리는 출발 물질의 미량 불순물이 후속 성능을 변화시킬 수 있다는 것을 생산을 통해 알고 있습니다. 이것이 바로 우리가 출시 전에 수분 함량, 잔류 할로겐화물 및 UV 동작을 확인하는 이유입니다. HPLC 실험실에도 동일한 원칙이 적용됩니다. 즉, 문서화된 사양과 함께 제공되는 재료를 선택합니다. 예를 들어, 1-부틸-3-메틸이미다졸륨 테트라플루오로보레이트 귀하의 검출 방법과 호환되는지 여부를 평가할 수 있는 순도 데이터가 제공됩니다.

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분석 증명서에서 확인해야 할 사항

• 잔류 할로겐화물 함량. 할로겐화물이 이온 교환 분리 및 부식에 영향을 미칠 수 있기 때문입니다.
• 수분 함량은 물이 첨가제의 유효 농도를 변화시키기 때문입니다.
• UV 스펙트럼 또는 UV 컷오프를 통해 배경 흡광도를 예측할 수 있습니다.
• 로트 간 일관성. 새로운 로트가 자동으로 방법을 변경해서는 안 되기 때문입니다.

재료와 방법을 일치시키는 데 도움이 필요한 경우 다음을 수행할 수 있습니다. 당사 기술팀과 순도 데이터 및 맞춤형 요구 사항에 대해 논의합니다. .

물을 방법의 일부로 취급

HPLC의 물 순도는 일회성 설정이 아닙니다. 계절과 저장병, 정수시스템의 상태에 따라 변할 수 있는 일일 변수입니다. 1종 물을 사용하고, TOC와 비저항을 확인하고, 적절하게 취급하고, 추적성이 있는 첨가물을 선택하세요. 나노그램의 분석물을 기반으로 구축된 방법에서 물은 결코 "단순한 물"이 아닙니다.